Coloração de Ziehl_Neesen

                                                                       Microbiologia  

Prof. Dr. Luis Carlos F. Carvalho 

Aula prática: coloração de Ziehl_Neesen 

Objetivo: 

Elaborar uma coloração para identificar os Bacilos Álcool-Ácido-Resistentes (BAAR) em material biológico, essencial no diagnóstico laboratorial de doenças infecciosas causadas por Micobactérias, tais como tuberculose e Hanseníase.

Princípio:

Existem bactérias que são resistentes à coloração, porém quando coradas, resistem fortemente à descoloração, mesmo quando submetidas a ácidos fortemente diluídos e ao álcool absoluto, sendo assim denominadas de bacilos álcool-ácido-resistentes (BAAR). A característica álcool-ácido-resistente é conferida a essas bactérias devido ao alto teor de lipídeos estruturais na parede celular, que causa uma grande hidrofobicidade, que dificulta a ação de corantes aquosos. Um exemplo de ácido graxo altamente presente na parede celular dessas bactérias é o ácido micólico.

Na técnica de Ziehl-Neelsen, após o processo de coloração da amostra, a fucsina de Ziehl irá corar todos os elementos celulares de vermelho, porém após a descoloração com o álcool, somente os bacilos álcool-ácidos-resistente irão continuar preservando a cor vermelha, os demais elementos celulares na amostra serão descoradas. Então, para podermos visualizar os outros elementos celulares (descorados) na amostra, deve-se utilizar azul de metileno, que dará um contraste, deixando os elementos celulares em azul e os bacilos álcool-ácidos-resistentes continuarão em vermelho.

Material: 

Laminas, swab estéril, solução de fucsina fenicada, solução de azul de metileno, solução de HCl a 5% em ácool, lamparina à álcool, fósforo, álcool comercial. 

 Método:

  Fixar a lâmina com o calor;

 Cobrir o esfregaço com fucsina fenicada;

 Aquecer em chama até emitir vapores. A partir disto, iniciar a contagem de cinco minutos;

 Lavar suavemente a lâmina em água;

 Colocar álcool-ácido clorídrico, até que o corante não se desprenda mais (cerca de dois

minutos);

 Lavar a lâmina com água;

 Cobrir o esfregaço com azul-de-metileno (durante trinta segundos);

 Lavar a lâmina com água;

 Deixar secar e observar ao microscópio com a objetiva de imersão.