Técnica de Semeadura

                                                                    Microbiologia  

Prof. Dr. Luis Carlos F. Carvalho 

Prática: Técnica de Semeadura 

Objetivo: 

Desenvolver as técnicas básicas de semeadura de material para isolamento de germes.

Princípio: 

Uma população microbiana, sob condições naturais, contém muitas espécies diferentes. Os microbiologistas devem ser capazes de isolar, enumerar, e identificar os microrganismos em uma amostra, para então classificá-los e caracterizá-los. Os microrganismos na natureza normalmente existem em cultura mistas, com muitas espécies diferentes ocupando o mesmo ambiente.

Ao determinar as características de um microrganismo, ele deve estar em cultura pura, ou seja, em que todas as células na população são idênticas no sentido de que elas se originaram de uma mesma célula parental.

Em laboratório, os microrganismos são cultivados ou desenvolvidos em material nutriente denominado meio de cultura. O tipo de meio utilizado depende de vários fatores :

 Considerações sobre a origem do material a ser analisado A espécie que se imagina estar presente nesta amostra As necessidades nutricionais dos organismos.

Técnica de Esgotamento: 

A mais utilizada para isolamento de germes em meio sólido (ágar sangue, ágar EMB, etc ), onde se utiliza uma alça de platina, previamente flambada e esfriada

Com a alça de platina, tocar suavemente na amostra.

Passar a alça sobre o meio de cultura em movimento de zigue-zague sem sobrepor as linha e sem recarregar a Alça1.

Incubar as placas a 37oC por 24 a 48 horas

Espalhamento “Pour Plate”: 

Consiste em fazer uma prévia diluição da amostra e colocar em uma placa de Petri vazia e depois derramar o meio sobre a amostra e agitar para homogenizar a amostra diluída com o meio de cultura. Técnica:

Fazer diluição seriada da amostra, ex. 1/10, 1/100 e 1/1000.

Colocar 1 ml de cada diluição em uma placa de Petri estéril

Fundir 10 ml de meio sólido e refriar a 65oC

Derramar sobre a amostra na placa e aplicar movimentos suaves na placa para misturar a amostra com o meio;

Esperar o meio solidificar novamente e incubar as placas a 37oC por 24 a 48 horas

Espalhamento Pos Plate: Consiste em espalhar a amostra diluida ou não sobre o meio com auxilio da alça de Drigalsky, para obter colonias isoladas.

Interpretação: Observar as colônias isoladas, caracterizadas pela formação de pontos isolados sobre o meio de cultura, após a incubação.